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ELISA试剂盒直接包被的方法
更新时间:2017-01-10   点击次数:1651次

ELISA试剂盒蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附联络的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用于。
蛋白质抗原大多也可选用与抗体类似的方法包被。
当抗原决定簇存在于或邻近于疏水区域时,抗原与固相载体的直接吸附可使抗原决定簇不能充分显露,在这种情况下,直接包被作用不佳,能够选用直接的捕获包被法,即先将对于该抗原的特异抗体作预包被,这今后通过抗原抗体反响使抗原固相化。
这种物理吸附对错特异性的,受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响。
载体对不一样蛋白质的吸附才干是不相同的,大分子蛋白质较小分子蛋白质一般富含更多的疏水基团,故更易吸附到固相载体表面。
IgG对聚苯乙烯等固相具有较强的吸附力,其联合多发生在Fc段上,抗体联络点显露于外,因此抗体的包被一般均选用直接吸附法。
此直接联络在固相上的抗原远离载体表面,其抗原决定簇也得以充分显露。
ELISA试剂盒直接包被的抗原经固相抗体的亲和层析作用,包被在固相上的抗原纯度大大进步,因此含杂质较多的抗原也可选用捕获包被法,试验的特异性、敏感性均由此得以改善,重复性亦佳。
将抗原或抗体固定在进程称为包被(coating)。
包被便是抗原或抗体联络到固相载体表面的进程。
直接包被的另一利益是抗原用量少,仅为直接包被的1/10乃至于/100。
抗心磷脂抗体的ELISA试剂一般选用这种包被方法。
不易吸附在聚苯乙烯载体上的非蛋白质抗原可选用格外的包被方法。
在查看抗DNA抗体时,需用DNA作为包被抗原,而遍及的固相载体一般不能直接与核酸联络。
可将聚苯乙烯板先经紫外线照射(例如30W紫外灯,75cm照射12小时),以增加其吸附功用。
固相载体先用碱性蛋白质,如聚赖氨酸、鱼精蛋白等作预包被,也可进步核酸的联络力。
也可用亲和素生物素系统作直接包被,即用亲和素先包被载体,然后参与生物素化的DNA,这种包被方法均匀、结实,已扩展应用于各种抗原物质的定量测定。 
ELISA试剂盒脂类物质无法与固相载体联络,可将其在有机溶剂(例如乙醇)中溶解后参与ELISA板孔中,开盖置冰箱过夜或冷风吹干,待酒精挥发后,让脂质天然干固在固相表面。

 

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