ELISA试剂盒双抗体夹心法是查看抗原zui常用的方法，操作过程如下：
将特异性抗体与固相载体联合，构成固相抗体。
洗刷除去别的未联络物质。
加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体联络。
洗刷除去未联络的抗体及杂质。
加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体联络，构成固相抗原抗体复合物。
*洗刷未联络的酶标抗体。
此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量有关。
抗体的来历为抗血清，包被和酶标用的抗体分别取自不一样种属的动物。
如运用单克隆抗体，一般挑选两个关于抗原上不一样抉择簇的单抗，分别用于包被固相载体和制备酶联络物。
类同于堆积反应中抗原过剩的后带现象，此时反应后显色的吸光值（位于抗原过剩带上）与标准曲线（位于抗体过剩带上），如按常法测读，所得效果将低于实践的含量，这种现象被称为钩状效应（hook effect），由于标准曲线到达后呈钩状弯落。
ELISA试剂盒双抗体夹心法钩状效应严重时，反应乃至可不显色而出现假阴性效果。
双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能构成两位点夹心。
在临床查验中，此法适用于查验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。
只需获得关于受检抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶联络物而树立此法。
在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体联络，而不再构成"夹心复合物"。
运用一步法试剂测定标本中含量可反常增高的物质（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）时，应留心可测规模的zui高值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。
假使在被测分子的不一样位点上富含多个一样的抉择簇，例如HBsAg的a抉择簇，也可用关于此抉择的同一单抗分别包被固相和制备酶联络物。
但在HBsAg的查看中应留心亚型疑问，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型，虽然每种亚型均有一样的a抉择簇的反应性，这也是用单抗作夹心法应留心的疑问。
ELISA试剂盒双抗体夹心法测抗原的另一留心点是类风湿因子（RF）的烦扰。
RF是一种自身抗体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段联络。
用作双抗体夹心法查看的血清标本中如富含RF，它可充任抗原成份，一起与固相抗体和酶标抗体联络，表现出假阳性反应。
选用F（ab'）或Fab片段作酶联络物的试剂，由于去除了Fc段，然后消除RF的烦扰。
ELISA试剂盒双抗体夹心法本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的不一样，寻觅适合的符号方法。